摩氏摩根菌LAMP試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 遲緩愛德華氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space: pre;"> 海豚鏈球菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 無乳鏈球菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 多子小瓜蟲核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 中華絨螯蟹螺原體核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 中華絨螯蟹呼腸孤病毒RNA核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 包納米蟲(Bona)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 腸出血性大腸桿菌O157核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 霍亂弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 霍亂弧菌O1型核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 霍亂弧菌O139型核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 銅綠假單胞菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 枯草芽孢桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre"> 嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒(恒溫?zé)晒夥ǎ?span style="white-space:pre">
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