熒光定量PCR試劑盒是一種用于定量檢測DNA或RNA的試劑盒，其工作原理主要基于聚合酶鏈式反應(PCR)和熒光探針技術(shù)。
聚合酶鏈式反應(PCR)是一種在體外模擬自然DNA復制過程的技術(shù)，通過重復的變性、退火和延伸循環(huán)，使目標DNA片段呈指數(shù)級擴增。在熒光定量PCR試劑盒中，首先將待測樣品與試劑盒中的試劑混合，然后進行PCR反應。在每個循環(huán)中，目標DNA片段的數(shù)量都會增加一倍，從而使得熒光信號也隨之增強。
熒光探針技術(shù)是其核心部分。在反應體系中，除了常規(guī)的PCR引物外，還加入了一段特異性的熒光標記探針。這段探針通常被設(shè)計為與目標DNA片段互補，并在其5'端標記有熒光報告基團(如FAM)，在3'端標記有熒光淬滅基團(如TAMRA)。當探針與目標DNA片段結(jié)合時，報告基團和淬滅基團之間的距離變近，導致熒光信號減弱。然而，在PCR延伸階段，由于Taq酶具有5'到3'的外切酶活性，會將結(jié)合在目標DNA上的探針切斷，使得報告基團和淬滅基團分離，熒光信號得以釋放并增強。
通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，可以準確地定量分析目標DNA片段的初始濃度。在熒光定量PCR試劑盒中，通常會設(shè)置一個閾值，當熒光信號達到該閾值時，所對應的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(CycleThreshold)。Ct值與目標DNA片段的初始濃度呈負相關(guān)，即目標DNA片段越多，Ct值越小。通過與標準曲線比較，可以計算出待測樣品中目標DNA片段的初始濃度。
熒光定量PCR試劑盒具有高靈敏度、高特異性、寬動態(tài)范圍和低變異系數(shù)等優(yōu)點，廣泛應用于病原體檢測、基因表達分析、遺傳疾病診斷等領(lǐng)域。通過使用不同的熒光標記探針和引物，可以實現(xiàn)對多個目標DNA片段的同時檢測和定量分析。
