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免疫組織化學(xué)技術(shù)染色注意事項(xiàng)

點(diǎn)擊次數(shù):947 更新時(shí)間:2015-07-02
 

注意事項(xiàng)

(1)免疫熒光法zui適宜進(jìn)行冰凍切片的染色,因?yàn)榇朔N切片一般抗原保存得較好。若是石蠟切片則應(yīng)首先選用免疫酶法等染色技術(shù)。

(2)使用商品的熒光標(biāo)記抗體,在進(jìn)行染色前應(yīng)作抗體效價(jià)的測定,找出合適的稀釋度后再進(jìn)行成批染色。一般而言,在陽性物質(zhì)發(fā)出明亮熒光而背景又較暗時(shí)的稀釋度是較為合適的。高稀釋度的熒光抗體可以減少非特異性著色使染色結(jié)果更具特異性,但稀釋度過高會導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)。低稀釋度的熒光抗體使結(jié)果較易觀察,但會帶來非特異性的著色,甚至出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。

(3)非特異熒光的消除。非特異性熒光的消除方法較多。一般而言,冰凍切片的非特異性熒光較強(qiáng),石蠟切片的非特異性熒光較弱。常用的方法有①先用非免疫血清如10%牛血清等處理切片,然后再行熒光染色。②用小鼠相應(yīng)組織的干粉吸收熒光抗體中的非特異性成分。③選擇合適的稀釋度和切片。④選用高特異性和價(jià)的熒光抗體。

(4)洗滌要*。每道程序都有用蒸餾水或緩沖液洗滌以清除殘留在切片中的 試劑,以達(dá)到特異著色的目的。洗滌時(shí)不論是沖洗還是振蕩洗滌,其基本原則是要達(dá)到洗滌干凈的目的,或者說充分稀釋上一道程序中的 試劑 ,使其含量降至zui低。一般只要有足夠的時(shí)間,以靜置廷長每次洗滌時(shí)間為宜,這是防止脫片的較好辦法。洗滌液的PH值應(yīng)為7.2~7.4之間,過高過低的不利于染色過程,尤其是在偏堿的PH值條件下。

(5)孵育時(shí)間與溫度。免疫熒光法一般孵育溫度在37℃,時(shí)間為20——30分鐘時(shí)是*時(shí)間與溫度。當(dāng)然,也與抗體的效價(jià),組織抗原的含量與部位,切片的厚度等有關(guān)。

英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白14(GLUT14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12(GLUT12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11(GLUT11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10(GLUT10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
抗體英文名稱 Rattus norvegicus (Rat) 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖氧化酶(GOD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 葡萄糖磷酸變位酶5(PGM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格: 48T/96T


 
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