elisa酶聯(lián)免疫試劑盒樣品的稀釋檢測范圍
1.根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。BCA工作液室溫下24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2.*溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取C液10微升稀釋至100微升,使終濃度為0.5mg/mL。原則上,蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用什么溶液稀釋。但我們強(qiáng)烈建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品及樣品。
3.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)在20-2000μg/mL之間。建議使用倍比稀釋法;建議取4~6個(gè)不同的濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線;建議每個(gè)濃度做2~3個(gè)復(fù)孔。
4.蛋白樣品的稀釋:將待測蛋白樣品稀釋到標(biāo)準(zhǔn)曲線所能檢測的范圍內(nèi)。在eppendorf管中對待測蛋白進(jìn)行稀釋,混勻??捎萌芙獾鞍椎囊后w進(jìn)行稀釋,但我們建議使用三蒸水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
5.在96孔板各孔中加入200μLBCA工作液,再在每孔中分別加入已稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和蛋白樣品各20μL,建議標(biāo)準(zhǔn)品做2~3個(gè)復(fù)孔。37℃放置30分鐘。
6.測定A562nm處的吸光度值,540-595nm之間的波長也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制
?。?)確定控制的對象;
(2)規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)(預(yù)期值);
?。?)制定或選擇控制方法和手段;
?。?)測量實(shí)際數(shù)據(jù);
?。?)比較或較對實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍,報(bào)警系發(fā)出信號(hào),反饋通道中斷。
(6)采取行動(dòng),解決差異?;謴?fù)原狀(原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計(jì)算出來的預(yù)期的"控制限"進(jìn)行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進(jìn)行時(shí),按時(shí)間順序而抽選出來的,其目的是檢測檢驗(yàn)過程中變異的"可追查"性原因。"可追逆"性的誤差原因,是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。"控制限"是通過統(tǒng)計(jì)計(jì)算出來的。