熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 綠膿假單胞菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pseudomonas aeruginosa | 貨號 | YSP97116 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 腦蛋白44(BRP44)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 隱紅堿線菌 25g Hairless蛋白(HR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 硫磺菌 5g 載脂蛋白L6(APOL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 北方蜜環(huán)菌 1g Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 地衣芽孢桿菌 25g 鈣黏蛋白12(CDH12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 西蕃蓮莖基腐病 5g 矢車菊苷γ3(CENTγ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 大腸埃希菌 5MG 矢車菊苷δ3(CENTδ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 雅致小克銀漢霉 50MG 矢車菊苷δ2(CENTδ2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 黃柄曲霉 100g 矢車菊苷δ1(CENTδ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 棲土曲霉 500g 羧肽酶X1(CPX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 黑化鏈霉菌 5g 二羥基激酶2(DAK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 環(huán)帶毛霉 100g 加帽酶2(DCP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 麥芽糖假絲酵母 25g 防御素β118(DEFβ118)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97.0% (HPLC) 分枝枝頂孢 1g Derlin 1蛋白(DERL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 芽孢桿菌 1g Derlin 2蛋白(DERL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 彎孢菌 250mg Derlin 3蛋白(DERL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 副豬嗜血桿菌 5g 白喉素合酶(DPH5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 雪腐鐮孢 1g DR1關聯(lián)蛋白1(DRAP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 香港科恩氏菌 5g 綠膿假單胞菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化Fas相關死亡結構域蛋白抗體ChRM3 peptide 毒蕈型酰膽受體M3抗原100 ul 酸化DNA甲基轉移酶1抗體CK18(Cytokeratin 18) 細胞角蛋白18(多肽)100 ul 酸化DNA甲基轉移酶1抗體CK18 peptide 細胞角蛋白18多肽抗原1 Kit 酸化DNA甲基轉移酶1抗體CK18(Cytokeratin 18) 細胞角蛋白18抗原(C端)1 Kit 7脫氫膽固還原酶抗體CK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原100 ul 大腦發(fā)育同源蛋白2抗體CK16(Cytokeratin 16) 細胞角蛋白16抗原1 Kit 退行性精母細胞同源物1抗體CK17(Cytokeratin 17) 細胞角蛋白17抗原1 Kit DSCC1蛋白抗體CK19 細胞角蛋白19多肽抗原100µl 誘捕受體2抗體CK1/8/19 (Cytokeratin1/8/19; Keratin 1/8/19)peptide 細胞角蛋白1/8/19抗原1 Kit PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |