客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
Anti-Annexin VI 膜粘連蛋白 VI抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Epigen 英文名稱： 上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體 0.2ml

谷氨酸受體2B抗體 Anti-NR2B/NMDAR2B 0.1ml

Anti-SLC34A2/NaPi-2b/FITC 熒光素標(biāo)記酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser15) 酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml

CA125 (Ovarian cancer Anti-gen) 卵巢癌抗原(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

人單純皰疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Herpes simplex virus 2,HSV-Ag2 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

C10orf47 英文名稱： 10號染色體開放閱讀框47抗體 0.2ml

Anti-GZMA 顆粒酶A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

LRP(Human Lung resistance-related protein) ELISA Kit 人肺耐藥蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HRG-alpha Heregulin α蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MBNL3 毒蕈堿樣蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml

NA(Human neuraminidase) ELISA Kit 人神經(jīng)酸酶 96T

Reprimo 英文名稱： 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體 0.1ml

酰胺酚紅瓊脂250克Acetamide Agar測定綠膿桿菌色素分離、培養(yǎng)

馬鈴薯葡萄糖肉湯250克PDB用于霉菌和酵母菌的培養(yǎng)

明膠瓊脂培養(yǎng)基250克Gelatin Agar Medium檢查細(xì)菌的明膠酶的能力

改良Frey氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)250克Frey Medium Modified Base培養(yǎng)滑液支原體及其他禽支原體用

制霉菌素檢定培養(yǎng)基250克Nystatin Medium制霉菌素效價(jià)測定用

麥迪、麥白霉素檢定培養(yǎng)基250克Medecamycin Medium麥迪、麥白霉素效價(jià)測定用
海魚分枝桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒高分子量角蛋白抗體PSD93/FITC  熒光素標(biāo)記突觸后密度蛋白93抗體IgG100 ul

22號染色體開放閱讀框39抗體Phospho-PSD93 (Tyr340) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化突觸后密度蛋白93抗體IgG100 ul

周期素G抗體PSD-95/FITC  熒光素標(biāo)記突觸后密度蛋白95抗體IgG100 ul

Crk p38抗體P-selectin/CD62p /FITC  熒光素標(biāo)記P選擇素抗體IgG100µl

酸化Crk p38抗體Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化突觸后密度蛋白95抗體IgG100 ul

核心結(jié)合因子α1抗體(成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子)Cbfα1PSMD9/Bridge-1 /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白酶調(diào)解因子9抗體IgG100 ul

膽囊收縮素8抗體PSP/FITC  熒光素標(biāo)記抗PSP抗體IgG10 ug

細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體Patched/PTCH /FITC  熒光素標(biāo)記Hh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑膜蛋白受體抗體IgG10 ug

細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體PN/MMAC1(NT)/FITC  熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制基因（N端）IgG100 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。