PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產品名稱 | 巴西諾卡菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nocardia brasiliensis | 貨號 | YSP97008 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 紅細胞補體受體1(CR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 阮氏菌 5g 細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 枯草芽孢桿菌 1g 胃動素(MTL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 構巢曲霉 5g 纖維蛋白原(FG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 用于離子色譜,≥99.0%(T) 殼菌 1g 肝細胞生長因子(HGF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 用于離子色譜,≥99.0%(T) 巴斯德酵母 5g 脂聯(lián)素受體2(ADIPOR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 博伊丁假絲酵母 250mg 氨基端前腦鈉素(NT-ProBNP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 史氏芽孢桿菌 100mg 脂聯(lián)素(ADP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 長枝木霉 100mg 組蛋白脫?;?(HDAC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 紅酵母屬 5g 血管緊張素Ⅲ(AngⅢ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 熱帶假絲酵母 1g 脊髓灰質炎病毒受體相關分子4(PVRL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(HPLC)(T) 壁芽孢桿菌 1g 胞漿蛋白1(STMN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(HPLC)(T) 犬種布魯氏菌 250mg 松弛肽(RLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 油菜菌核病菌 1g 抗酸膽堿受體抗體(Anti-AChR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 豌豆根瘤菌 5g Slit同源物1(Slit1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 花楸近藤氏酵母 5g Ⅰ型前膠原(PCⅠ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 大腸埃希氏桿菌 100g Ⅲ型前膠原(PCⅢ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 三線鐮刀菌 25g 攝食抑制因子1(NES1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 北京擲孢酵母 5g 巴西諾卡菌探針法熒光PCR檢測試劑盒3號染色體開放閱讀框33抗體VEGF/RBITC 羅丹明標記VEGF抗體IgG100 ul 3號染色體開放閱讀框39抗體Mouse human VEGF/FITC 熒光素標記抗VEGF單克隆抗體IgG20 ul 3號染色體開放閱讀框59抗體YAP1/FITC 熒光素標記原癌基因Yes相關蛋白1抗體IgG5 mg 5號染色體開放閱讀框51抗體VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC 熒光素標記血管內皮生長因子受體1抗體IgG100 ul 3號染色體開放閱讀框70抗體VEGFR2(VEGF-R2)Flk1/FITC 熒光素標記血管內皮生長因子受體2抗體IgG150 ul 2號染色體開放閱讀框68抗體SV2A/FITC 熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG1 Kit 2號染色體開放閱讀框47抗體sVEGFR2/sFLK-1/FITC 熒光素標記可溶性血管內皮生長因子受體2抗體()IgG1 Kit CD83抗體p-VEGFR2/FITC 熒光素標記兔抗、大、血管內皮生長因子受體2抗體IgG100 ul 17號染色體開放閱讀框59抗體FLT-3/CD135/FITC 熒光素標記兔抗、大、FMS樣酪氨酸激酶3IgG100 ul |