PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
細(xì)胞KUNEL測定試劑盒　LRRC41 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片KUNEL測定試劑盒　LRRC47 ELISA Kit　100 ul

石蠟切片KUNEL測定試劑盒　LRRC47 ELISA Kit　100 ul

藍(lán)色熒光細(xì)胞核染色分析試劑盒　LRRC4C ELISA Kit　100 ul

通用型細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒　LSG1 ELISA Kit　100 ul

PROPIDIUM IODIDE細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒　LRRC52 ELISA Kit　100 ul

CHROMOMYCIN A3細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒　LRRC18 ELISA Kit　100 ul

HOECHST 33342和PROPIDIUM IODIDE細(xì)胞膜變檢測試劑盒　LRCH3 ELISA Kit　100 ul

TUNEL流式細(xì)胞儀分析試劑盒　LRRC20 ELISA Kit　100 ul

動物細(xì)胞/組織細(xì)胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒　LRCH2 ELISA Kit　100 ul

植物細(xì)胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒　LRDD ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織細(xì)胞色素C免疫組織化學(xué)檢測試劑盒　LRMP ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞調(diào)亡DNA條帶檢測試劑盒　LRP2BP ELISA Kit　100 ul

ANNEXIN V－FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒　LRPPRC ELISA Kit　20 ul

Phalloidin－FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒　LRPAP1 ELISA Kit　100 ul

核抗原－FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒　LRRC1 ELISA Kit　100 ul
變異鏈球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒FUT5抗體PDGF-AB  血小板衍生生長因子20 ul

叉頭蛋白O3A抗體PDGF-BB  血小板衍生生長因子-BB100 ul

卵泡相關(guān)蛋白1PGE1  1100 ul

成纖維細(xì)胞生長因子受體5抗體PGE2  2100 ul

酸化粘著斑激酶抗體P53  P53蛋白100 ul

酸化粘著斑激酶抗體Osocalcin  骨鈣素100 ul

口蹄疫病毒A型抗體Oxytoxin  催產(chǎn)素100 ul

FBXO28蛋白抗體UPAR  凝血酶受體100 ul

FBXW5蛋白抗體progesrone  孕酮100 ul