客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
肌動(dòng)蛋白聚合作用（polymerization）檢測(cè)試劑盒　GRK5 ELISA Kit　20 ul

體外微管蛋白聚合作用（polymerization）比色法檢測(cè)試劑盒（300微克，標(biāo)準(zhǔn)樣）　Mortalin(75 kDa glucose-regulated protein) ELISA Kit　100 ul

純化微管蛋白（Tubulin）　GTDC1 ELISA Kit　1 Kit

體外微管蛋白聚合作用（polymerization）熒光檢測(cè)試劑盒　GRK6 ELISA Kit　100 ul

體內(nèi)微管蛋白聚合作用（polymerization）檢測(cè)試劑盒　GRPEL1 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞骨架（肌動(dòng)蛋白微絲；F-ACTIN）綠色熒光染色試劑盒　GSDMD ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞骨架（肌動(dòng)蛋白單體；G-ACTIN）紅色熒光染色試劑盒　GRWD1 ELISA Kit　100 ul

微管（microtubules）熒光染色試劑盒　GSDMB ELISA Kit　1 Kit

粘著斑蛋白（vinculin）熒光染色試劑盒　GSPT1 ELISA Kit　100 ul

驅(qū)動(dòng)蛋白（kinesin）型ATP酶活性酶連續(xù)反應(yīng)光譜法定量檢測(cè)試劑盒　GSG1L ELISA Kit　100 ul

3,4-二氫嘧啶酮衍生物Monastrol（K-ATPase 抑制劑）　GSPT2 ELISA Kit　100 ul

細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒　GPRIN3 ELISA Kit　100 ul

載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　GPS2 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片組織αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　GPSM2 ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒　GPX4 ELISA Kit　100 ul

載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒　GPX7 ELISA Kit　100 ul
水牛泰勒蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒G蛋白α抑制蛋白1抗體PARC/CCL18(Human pulmonary activation regulad chemokine) ELISA Kit  肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子100 ul

生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6抗體MAdCAM-1(Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1) ELISA Kit  黏膜地址素細(xì)胞黏附分子100 ul

谷胱甘肽合成酶抗體IFN- Beta/IFNB(Human Inrferon Beta) ELISA Kit  β干擾素300 ul

血型糖蛋白δ抗體sCD38(Human Soluble Clusr of differentiation 38) ELISA Kit  可溶性CD38100 ul

糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)亮氨酸拉鏈蛋白抗體CR2/sCD21(Human Soluble Clusr of differentiation 21) ELISA Kit  可溶性CD21300 ul

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶6抗體sLR(Human Leptin Soluble Receptor) ELISA Kit  可溶性瘦素受體100 ul

G氨基丁酸受體δ/GABAA Rδ抗體TLR-9/CD289(Human Toll-like receptor 9) ELISA kit  Toll樣受體9100 ul

G氨基丁酸受體γ1/GABAA Rγ1抗體TGF Beta2(Human transforming growth factors Beta2) ELISA Kit  轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2100 ul

酸化γ氨基丁酸γ2受體抗體MCP-4/CCL13(Human monocy chemotactic proin 4) ELISA kit  單核細(xì)胞趨化蛋白4100 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。